Gambaran Keseluruhan dan Penyediaan Icatibant acetate

Gambaran keseluruhan

Icatibant acetate ialah rawatan khusus penyakit untuk angioma hemangioid (HAE) yang dibangunkan oleh Shire, yang menerima kelulusan FDA pada 25 Ogos 2011, untuk pengurusan episod akut angioedema keturunan pada orang dewasa berumur 18 tahun ke atas. Ia juga merupakan ubat ketiga yang diluluskan oleh FDA untuk merawat serangan HAE. Icatibant acetate mempunyai struktur yang serupa dengan d-decapeptide seperti bradikinin tetapi mengandungi lima asid amino bukan protein. Ia bertindak sebagai antagonis kompetitif yang kuat dan terpilih bagi reseptor bradikinin jenis 2 (B2), mengurangkan bengkak, keradangan dan kesakitan setempat yang berkaitan dengan episod HAE dengan menghalang kesan bradikinin. HAE mewakili hanya satu daripada beberapa petunjuk yang berpotensi untuk menunjukkan icatibant; aplikasi lain yang berpotensi termasuk asma, sirosis hati, dan jenis angioedema yang lain. Akibatnya, icatibant acetate mempamerkan nilai terapeutik yang ketara dan prospek pasaran yang luas.

Formula struktur kimia bagiIcatibant acetate

EpentingImaklumat

nama Cina:醋酸艾替班特

Nama Inggeris: Icatibant acetate

ID syarikat：GT-F005

CAS：138614-30-9；130308-48-4

Snombor erial：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH   

Mformula olekular：C59H89N19O13S

Mberat olekular：1304.52

Icatibant acetate spektrum MS

Laluan Sintetik

1: Penyediaan resin Fmoc-Arg(Pbf)-CTC

Tambah 11.1 g resin 2-chlorotrifenylmethylicloride dengan kadar penggantian 0.9 mmol/g ke lajur tindak balas fasa pepejal, diikuti dengan penambahan resin bengkak DMF selama 30 minit. Tambah 3.50μL DIPEA kepada 12.98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH dan aktifkan selama 5 minit; kemudian masukkan resin bengkak DMF dan biarkan campuran mencapai keseimbangan selepas 10 minit. Tambah lagi 3.50μL DIPEA, bertindak balas pada suhu bilik selama 45 minit, dan akhir sekali tutup dengan metanol selama 20 minit. Sejatkan campuran tindak balas, basuh tiga kali dengan DMF, tiga kali dengan DCM, dan kemudian mengecut tiga kali dengan metanol selama 3 minit, 5 minit, dan 8 minit masing-masing, menghasilkan resin Fmoc-Arg(Pbf)-CTC dengan kadar penggantian terukur 0.5 mmol/g.

2：Gandingan daripada Fmoc-Oic-OH

Timbang 10 mmol resin Fmoc-Arg (Pbf)-CTC dan tambahkannya pada reaktor fasa pepejal, bengkak dalam DMF selama 0.5 jam, kemudian keluarkan perlindungan Fmoc dua kali menggunakan larutan DBLK 20% selama 10 minit dan 5 minit masing-masing; selepas dicuci, gabungkan dengan Fmoc-Oic-OH. Larutkan 11.73 g Fmoc-Oic-OH, 4.9 g HOBt, dan 6.1 mL DIC dalam DCM (sebilangan kecil DMF boleh ditambah untuk pelarutan), aktifkan campuran dalam mandi air ais selama 7 minit, kemudian pindahkannya ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam Titik akhir tindak balas ditentukan oleh kaedah indantron. Setelah selesai, aspirasikan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, keluarkan perlindungan Fmoc dua kali menggunakan larutan DBLK 20% masing-masing selama 10 minit dan 5 minit, basuh semula, dan sediakan untuk digandingkan dengan asid amino seterusnya.

3：Gandingan daripada Fmoc-D-Cit-OH

Larutkan 11.91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5.00 g HOAt dan 11.4 g HATU dalam DCM (dengan sedikit DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.87 g DIPEA di bawah mandian air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Penyelesaian tindak balas ditentukan oleh kaedah indiol. Selepas tindak balas, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, dan hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan larutan DBLK 20%. Selepas mencuci, sediakan untuk gandingan dengan asid amino seterusnya.

4：Gandingan daripada Fmoc-Ser(tBu)-OH

Larutkan 11.49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5.00 g HOAt dan 6.1 mL DIC dalam DCM (dengan sejumlah kecil DMF ditambah untuk pelarutan). Selepas pengaktifan di bawah mandi air ais selama 7 minit, pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam; penyelesaian tindak balas ditentukan oleh kaedah indiol. Setelah selesai, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, kemudian hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan larutan DBLK 20%, diikuti dengan mencuci sebelum meneruskan gandingan dengan asid amino seterusnya.

5：Gandingan daripada Fmoc-Thi-OH

Larutkan 11.79 g Fmoc-Thi-OH, 5.00 g HOBt dan 11.37 g HBTU dalam DCM (dengan sedikit DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.87 g DIPEA di bawah mandian air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan biarkan tindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Penyelesaian tindak balas ditentukan oleh kaedah indiol. Selepas tindak balas, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, dan hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan larutan DBLK 20%. Selepas mencuci, sediakan untuk gandingan dengan asid amino seterusnya.

6：Gandingan daripada Fmoc-Gly-OH

Larutkan 8.91 g Fmoc-Gly-OH, 5.00 g HOBt dan 9.63 g TBTU dalam DCM (dengan sedikit DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.63 g TMP di bawah mandi air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan biarkan tindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Penyelesaian tindak balas ditentukan oleh kaedah indanone. Selepas tindak balas, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, dan hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan larutan DBLK 20%. Selepas mencuci, sediakan untuk gandingan dengan asid amino seterusnya.

7：Gandingan daripada  Fmoc-Hyp(tBu)-OH

Larutkan 12.27 g Fmoc-Hyp(tBu)–OH, 5.00 g HOAt, dan 9.66 g TATU dalam DCM (dengan sedikit DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.63 g TMP di bawah mandi air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Titik akhir tindak balas ditentukan oleh kaedah indiol. Selepas selesai, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, dan hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan larutan DBLK 20%. Selepas mencuci, sediakan untuk gandingan dengan asid amino seterusnya.

8：Gandingan daripada Fmoc-Pro-OH

Larutkan 10.11 g Fmoc-Pro-OH, 5.00 g HOAt, dan 11.4 g HATU dalam DCM (dengan sedikit DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.87 g DIPEA di bawah mandian air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Titik akhir tindak balas ditentukan oleh kaedah indiol. Setelah selesai, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, dan hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan DBLK 20%. Selepas mencuci, sediakan untuk gandingan dengan asid amino seterusnya.

9：Gandingan daripada Fmoc-Arg(Pbf)-OH

Larutkan 19.44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5.00 g HOAt dan 11.4 g HATU dalam DCM (dengan sejumlah kecil DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.87 g DIPEA di bawah mandian air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Penyelesaian tindak balas ditentukan oleh kaedah indiol. Selepas tindak balas, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, dan hilangkan perlindungan Fmoc menggunakan larutan DBLK 20%. Selepas mencuci, sediakan untuk gandingan dengan asid amino seterusnya.

10：Gandingan daripada Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH

Larutkan 19.44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5.00 g HOAt dan 11.4 g HATU dalam DCM (dengan sejumlah kecil DMF ditambah untuk pelarutan). Tambah 3.87 g DIPEA di bawah mandian air ais dan aktifkan selama 7 minit; kemudian pindahkan campuran ke reaktor fasa pepejal dan bertindak balas pada suhu bilik selama 1–2 jam. Titik akhir tindak balas ditentukan oleh kaedah indiolone. Selepas selesai, keluarkan campuran tindak balas, basuh dengan DMF, kemudian gunakan DBLK 20% untuk mengeluarkan perlindungan Fmoc. Basuh tiga kali dengan DMF, tiga kali dengan DCM, dan tiga kali dengan metanol untuk pengecutan (selama 3 min, 5 min, dan 8 min masing-masing), diikuti dengan pengeringan vakum untuk mendapatkan resin peptida asetat etibant.

Kromatogram HPLC bagi Icatibant acetate

11：Pirolisis resin Icatibant asetat

Sediakan 200 mL reagen lisis yang mengandungi 190 mL asid trifluoroasettik, 6 mL triisopropilsilane, dan 4 mL air, dan prasejukkannya di dalam peti sejuk selama 30 minit. Tambah 20.0 g resin peptida asetat etibant ke dalam kelalang bawah bulat 500 mL, kemudian tambahkan reagen lisis 200 mL yang disediakan ke dalam resin sambil kacau di bawah tab mandi ais dan di bawah aliran nitrogen. Selepas 30 minit tindak balas, keluarkan mandi ais dan teruskan tindak balas pada suhu bilik selama 2 jam. Tapis resin dan kumpulkan turasan. Basuh resin dengan sedikit asid trifluoroacetic, tapis, dan gabungkan turasan. Tambah turasan secara beransur-ansur kepada 20 L eter ais sejuk; terbentuk endapan putih. Sentrifuge pada 3000 rpm untuk mengumpul mendakan, basuh lima kali dengan eter ais sejuk, dan keringkan di bawah tekanan yang dikurangkan untuk mendapatkan 10.3 g peptida mentah dengan ketulenan HPLC> 90%.