5-Aminofluorescein

5-Aminofluorescein (juga dipanggil 5‑AF atau Fluoresceinamine) digunakan secara meluas sebagai reagen pelabelan pendarfluor. Amina utama 5-Aminofluorescein boleh bertindak balas dengan kumpulan karboksil (melalui pengaktifan EDC/NHS), aldehid, keton, atau ester diaktifkan (cth., ester NHS) untuk membentuk rantaian amida atau imina yang stabil. Ia mempamerkan pengujaan maksimum pada ~ 490 nm (λmax = 496 nm dalam penimbal borat pH 8.5) dan maksimum pelepasan pada ~ 515 nm, memberikan isyarat hijau terang dengan kestabilan foto yang baik dan anjakan Stokes kira-kira 40 nm. Keamatan pendarfluornya bergantung kepada pH, meningkat terutamanya dalam keadaan beralkali (pH 8-9), yang dikaitkan dengan perubahan dalam keadaan protonasi kumpulan amino.

5-Aminofluorescein telah menemui penggunaan meluas dalam penyelidikan biologi dan perubatan - daripada pelabelan protein dan antibodi kepada membina sistem penghantaran ubat yang disasarkan dan penderia pendarfluor. 5-Aminofluorescein juga merupakan perantara utama dalam sintesis fluorescein isothiocyanate (FITC Isomer I), salah satu reagen paling popular untuk pelabelan protein.

Parameter Produk

Nota Penyediaan & Penyimpanan

5‑AF biasanya disintesis bermula daripada asid 4‑nitrophthalic, diikuti dengan pengurangan (cth., dengan hidrazin/FeOOH) dan pemeluwapan dengan resorsinol dalam asid metanesulfonik. Produk mentah ialah campuran 5‑ dan 6‑isomer, yang dipisahkan dengan penghabluran. Kaedah moden (berbantukan gelombang mikro atau enzim) boleh meningkatkan hasil dan mengurangkan produk sampingan. Pembersihan akhir oleh HPLC memastikan ketulenan ≥95%, dengan struktur yang disahkan oleh NMR dan MS.

Penyimpanan - Kompaun ini sensitif kepada cahaya, udara dan kelembapan. Simpan dalam bekas yang dimeteraikan dengan argon-purged pada suhu 4°C dalam gelap. Untuk penyimpanan jangka panjang (>6 bulan), -20°C sebagai serbuk disyorkan (stabil untuk sekurang-kurangnya 3 tahun). Penyelesaian dalam DMSO boleh disimpan pada -80°C selama 6 bulan atau pada -20°C selama 1 bulan. Elakkan kitaran pembekuan-pencairan berulang. Pengangkutan pada suhu ambien boleh diterima jika dilindungi daripada cahaya dan kelembapan.

Soalan Lazim (FAQ)

S1: Apakah perbezaan antara 5‑Aminofluorescein (5‑AF) dan FITC? Bagaimana saya memilih?

J: Kedua-duanya adalah pewarna pendarfluor hijau, tetapi kumpulan reaktifnya berbeza.

● 5‑AF mempunyai amina primer (–NH₂). Ia memerlukan pengaktifan kumpulan karboksil sasaran (menggunakan EDC/NHS) sebelum konjugasi. Terbaik untuk melabelkan molekul yang sudah mengandungi kumpulan karboksil.

● FITC mempunyai kumpulan isothiocyanate (–N=C=S) yang bertindak balas secara langsung dengan amina pada sasaran (cth., residu lisin dalam protein) – tiada pengaktifan awal diperlukan. FITC lebih mudah untuk pelabelan protein rutin.

● Pilih 5‑AF jika anda memerlukan konjugasi berorientasikan khusus (cth., melalui pemegang karboksil) atau jika anda bercadang untuk mensintesis terbitan pendarfluor tersuai. FITC biasanya lebih mudah untuk pelabelan antibodi langsung.

S2: Apakah keadaan tindak balas biasa untuk melabelkan biomolekul dengan 5‑AF?

J: Kaedah yang paling biasa ialah gandingan amida: aktifkan kumpulan karboksil pada molekul sasaran dengan EDC dan NHS (dalam penimbal MES atau PBS, pH 5.5–6.5), kemudian tambah 5‑AF dan laraskan kepada pH 7.5–8.5. Inkubasi pada suhu bilik atau 37°C selama 2–4 ​​jam. Untuk sasaran yang mengandungi aldehid (cth., glikoprotein), gunakan aminasi reduktif dengan natrium cyanoborohidrida. Pewarna yang tidak bertindak balas boleh dikeluarkan dengan penyahgaraman atau dialisis. Nisbah molar pewarna-ke-protein 5:1 hingga 20:1 ialah titik permulaan yang baik.

Kenapa Cosperpharm? – Kelebihan Persaingan Kami

Hubungi kami

Sama ada anda memerlukan sampel kecil untuk percubaan perintis atau kuantiti pukal untuk pengeluaran komersial, Cosperpharm bersedia untuk menyokong anda. Hubungi kami hari ini untuk membincangkan keperluan anda untuk 5-Aminofluorescein – dan mari lihat cara kami boleh membantu memajukan projek anda.